技術文章
Technical articles
由A型流感病毒引起的禽流感，其臨床癥狀因感染禽的年齡、種類、飼養管理水平、并發感染情況及新感染毒株的毒力等不同而表現不一致。其病理變化因感染病毒株毒力的高低、病程的長短及種類不同也不盡相同。因此，禽流感的診斷一直依賴于病原的分離鑒定，OIE也一直采取的是進行病毒分離鑒定這個黃金標準。隨著血清學實驗技術和生物工程技術的飛速發展，禽流感診斷技術的研究也取得了新的進展。對于禽流感傳統的病原學診斷方法是用雞胚或者狗腎細胞（MDCK）、雞胚成纖維細胞（CEF）等進行病毒分離，采用血凝和...
使用血清培養凝集試驗方法檢出率很高，而且快速，介紹如下。（1）血清培養凝集試驗在3％胰蛋白胨肉膏湯（或肝化湯）中，加人（1；40）一（1：80）的丹毒高免血清，同時每毫升再加入400leg卡那霉素50／lg慶大霉素及2Stag萬古霉素（缺乏抗生素時，可加0．05％疊氦鈉及o．0005％結晶紫），制成丹毒血清抗生素診斷液（如分裝安瓿瓶管置4~C冰箱內可至少保存2個月）。生前取病豬耳尖血1滴，死后則蘸取病料少許于安瓿瓶管內，37~C培養14-24h。凡管底出現凝集顆粒或團塊時即判...
日本Okayama大學的研究者們建立了檢測豬丹毒的PCR方法（1999）。常規細菌培養檢測豬丹毒至少要3天，鑒定血清型大約要lo天，而這種PCR法可在5h內完成。它使用兩步擴增法，先用高度特異性引物組M0101-M0102進行初步擴增之后，再添加4種特異性寡核苷酸引物組對4種不同血清型豬丹毒的16SrRNA序列進行擴增。rRNA基因簇包括16SrRNA、23SrRNA、5SrRNA、下游非編碼區。對該簇編碼的DNA序列進行測定，以設計種特異性PCR檢測系統的引物。豬紅斑丹毒絲...
純化的抗體可通過不同的途徑獲取，就本書中描述的大多數情況而言，這些抗體可通過下述方法制備或從商家購買。從商家購買的抗體，通常附有正確的儲存方法。1．經純化制備的抗體在常用的緩沖液中是穩定的。其DH應保持在中性左右。如果pH在7-8之間，即使保存多年，對抗體也無損害。多數情況下，鹽濃度適于保持在0～150mmol／L之間，但在長期存放的抗體中，鹽溶液濃度高達500mmol／L時，對抗體可能有損害。如果沒有其他說明．律議用PBS或50mmol／LTris（DH8．0）溶液長期存放...
免疫親和純化技術常用于從多克隆抗體樣本中純化抗原特異性抗體。在這個過程中，純抗原共價結合于固相支持物上，多克隆混合抗體中的那些對該抗原特異的抗體能和它結合。經過沖洗，將未結合的抗體除去，然后再將特異性抗體洗脫。這種方法不適用于單抗，因為它們與抗原結合的活性相同。免疫親和純化技術常用于下面兩種情況。*種情況是抗肽抗體的制備。在制備抗肽抗體的過程中，要將抗肽抗體所針對的合成肽結合到載體蛋白上，以產生有效的免疫原性。針對肽—載體復合物的多克隆抗體產生后，通常并不能直接使用，而要從血...
[檢測方法]ELISA法[方法學原理]將血吸蟲可溶性抗原與固相載體聯結形成固相抗原，加待檢血清，如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結合，形成固相抗原抗體復合物；再加HRP標羊抗人IgG抗體，形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標記抗體復合物，在此基礎上加酶底物顯色，顏色深度與抗體含量成正比。[標本準備]不抗凝靜脈血2ml[試劑]1．日本分體血吸蟲可溶性抗原2．HRP標記羊抗人IgG3．0．05mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液4．稀釋液和洗滌液5．酶底物液6．2mol／LH25...
瘧疾（malaria）是瘧原蟲經按蚊叮咬傳播的傳染病，臨床上以間歇性寒戰、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征，惡性瘧疾能引起兇險發作。常見檢測方法為間接熒光抗體染色法檢測瘧原蟲抗體。[檢測方法][方法學原理]抗原片上加患者血清，若血清中含有瘧原蟲抗體，即可與抗原結合成相應的抗原抗體復合物，此復合物再與熒光標記抗人IgG抗體結合，zui后通過熒光顯微鏡觀察熒光反應。[試劑]1．0．01mol／LpH7．6PBS2．熒光標記抗人IgG抗體3．陰性對照、陽性對照血清4．抗原片[檢測步驟...
對于組織培養中生長的細胞，zui有效的裂解方法是用去污劑進行處理。雖然有多種去污劑可用于裂解細胞，但zui常用的是TritonX—100或NP—40等非離子型去污劑。非離子型去污劑能溶解胞質和細胞膜，破壞分子間許多微弱的結合鍵，并能溶解大部分經常研究的蛋白質抗原，但對于大分子多聚抗原則無效，在大多數情況下該抗原也是難以研究的。濃度介于0．1％～1％的去污劑即可滿足幾乎所有溶解需求。非離子型去污劑裂解液一般補充等離子濃度的鹽和接近中性的pH。在某些情況下，需要較劇烈的抽提條件以...
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