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微量移液器（micropipet）是進行生化實驗或分子生物學實驗的*工具，然而使用方法的正確與否，以及微量移液器的準確性，都直接影響了實驗結果的正確性，故請對你持有之微量移液器作深入的認識。本實驗室所使用的微量移液器為GilsonPipetmanP系列，包括P1000,P200,P20等。以下使用方法及注意事項，部份取材自原廠所附說明書，請詳讀之后才進行實驗。1）請參照圖1.1，認識微量移液器每一部份組件之位置及名稱。2）將D（ejector）取下，C（connectingn...
儀器用具：迷你電泳槽及鑄膠器（MupidII）；UVtransilluminator及影像分析系統；防護面罩藥品試劑：瓊脂糖粉末（agarose,lowEEO）1×TAE電泳緩沖液（40mMTris-acetate,1mMEDTA,pH8.0）：由50×TAE（每1L含242gTrisbase,57.1mLglacialaceticacid,100mL的0.5MEDTA-8.0）稀釋使用。10×追蹤染劑（0.25%bromophenolblue,0.25%xylenecyan...
儀器用具：37℃及65℃水浴或恒溫槽藥品試劑：質體pBluescriptIISK（-）限制酶：BamHI,PvuII及ScaI（濃度均為10units/μL,Invitrogen）10×Reactionbuffer6（0.5MTris-HCl,pH7.4;60mMMgCl2;0.5MNaCl;0.5MKCl）無菌水方法步驟：1）取7支微量離心管，依下表所列體積（單位μL）依序加于管壁不同位置上。◆每次吸取限制酶時，請換一支新的微量移液器頭以免造成污染。總體積為20μL，短暫離...
方法步驟：1）前一天轉形的培養皿，當菌落長至約0.5mm大小時，將培養皿移至4℃放置1h。2）準備一張無菌的硝化纖維濾膜，以鉛筆在邊緣標上組別。◆請戴手套后再拿取濾膜！3）打開培養皿蓋子，以兩支扁平鑷子將濾膜兩邊夾住，輕輕覆蓋在菌落上方，盡可能避免有氣泡產生。◆注意！濾膜覆蓋上去后就不要再移動！4）等濾膜*濕透后，以針頭在濾膜邊緣戳洞做記號（至少做三個記號）。小心把濾膜掀起，菌落朝上放置在LB/Amp/IPTGplate上。蓋上蓋子，在37℃培養2~4h，以誘導啟動T5pro...
儀器用具：平端鑷子藥品試劑：Nitrocellulose濾膜LB/Amp/IPTG/X-Glucplate（LBplate添加100μg/mLampicillin,0.2MIPTG,50μg/mLX-Gluc）方法步驟：1）前一天進行轉形的培養皿，當菌落長至約0.5mm大小時，將培養皿移至4℃放置至少1h。2）準備一張無菌的硝化纖維濾膜，以鉛筆在邊緣標上組別。◆請戴手套后再拿取濾膜！3）打開培養皿蓋子，以兩支扁平鑷子將濾膜兩邊夾住，輕輕覆蓋在菌落上方，盡可能避免有氣泡產生。◆...
方法步驟：1）吸取20μL的蛋白質樣本，小心注入微量滴定盤中，避免氣泡產生。2）每一樣品槽加入200μL基質液，混合均勻；可用燒熱的接種環去除氣泡。3）靜置約1~2min，顏色開始加深，然后加入30μL終止液。反應時間的長短，要以樣本中的酶活性大小來做調整。因為我們只測定色析法各分劃的相對酶活性，因此并不加終止液。4）以ELISA光度計測定波長415nm的吸光值。酶活性單位的測定：a.以上步驟，只可測定GUS活性的相對大小，對色析法所得到的各個分劃進行偵測，相當方便，但并非酶...
方法步驟：1）尿素洗過夜的轉印紙再以10mLPBST洗三次，每次約10min，均在上述方形培養皿中進行。2）轉印紙放在明膠NET溶液中反應，置室溫中反應1h。一般使用方形培養皿當容器，但亦可裝入塑料袋中反應，較節省試劑用量。3）反應后，以PBST浸洗二次。4）把轉印紙放在抗體溶液中反應，置室溫反應1h。5）反應后以PBST洗三次，改用酶聯體反應，在室溫下反應1h。6）以PBST洗四至五次，注意容器也要洗干凈。7）加入DAB基質溶液約10mL呈色，盡量避光，并且不時搖動呈色液。...
[方法]1．配制4個50ulPCR反應混合液，包含：●去離子水，35．5ul●20×dNTP（每種5mmol/L），2．5ul●10×Vent聚合酶緩沖液，5．0ul●LMB3引物（10pmol/ul），2．5ul●VL—NotI引物（10pmol/ul），2．5ul●scFV基因模板DNA（100ng），1ul●VentDNA聚合酶（2單位），1．0ul2．在有加熱蓋的熱循環儀內，加熱反應混合液到94℃5分鐘。3．以94℃1分鐘、42℃1分鐘、72℃2分鐘的條件共循環30次...
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